PEROKSİNİTRİTİN PLAZMA ANTİOKSİDAN DÜZEYLERİNE VE TİROZİN NİTRASYONUNA ETKİSİ
The Effect of Peroxynitrite on Plasma Antioxidant Level and Tyrosine Nitration
Turkiye Klinikleri J Med Res. 2002;20(3):132-7
Article Language: TR
Full Text
ÖZET
Amaç: Bu çalışma, in vivo ve in vitro olarak ONOO" aracılıklı oksidatif stresin etkilerini görmek için yapılmıştır. Materyal ve Metodlar: İn vitro çalışmalarda; 0.5-1-2-4 mmol/L konsantrasyonlarında hazırlanan ONOO" rat plazmalarına eklenerek, ONOO in plazma ürik asit ve askorbik asit düzeylerine direkt etkisi araştırıldı. Ayrıca plazma 3-NT düzeylerine bakıldı. In vivo çalışmalarda ise; 12xl09 koloni oluşturan ünite/ ml/kg dozda E.coli intraperitonel olarak tatlara enjekte edildi. E.coli uygulamasından 6 saat soma rat kanları toplanarak, endojen olarak oluşan ONOO" in plazma ürik asit ile askorbik asit düzeylerine etkileri incelendi. Ayrıca ONOO" aracılıklı oksidatif stresin bir markın olarak plazma 3-NT düzeyleri de incelendi. Plazma ürik asit düzeyleri ürikaz metodu ile, askorbik asit düzeyleri ise 2,4 dinitrofenilhidrazin üzerine kurulan modifiye bir metodla saptandı. Plazma 3-NT düzeyleri ise HPLC metodu ile yapıldı. Bulgular: İn vitro çalışmalarda; eksojen olarak eklenen ONOO" in doza bağlı olarak plazma 3-NT düzeylerini artırırken, plazma ürik asit ve askorbik asit seviyelerini azalttığını gözledik. İn vivo çalışmalarda ise; kontrol gruplarına göre lipopolisakkarit tarafından indüklenen stresin, plazma 3- NT düzeylerini önemli ölçüde artırdığını gözledik (p< 0.001). Ayrıca, E.coli enjekte edilen gruplarda plazma lirik asit değerleri hemen hemen kontrolün yarısına kadar inerken (p< 0.01), benzer şekilde plazma askorbik asit düzeyleri de kontrol grubu ile karşılaştırıldığında %61 oranında azaldı (p< 0.01). Sonuç olarak, in vitro ve in vivo ONOO", plazma askorbat ve ürik asit azalmasına ve 3-NT seviyesinin artmasına sebep olmaktadır.
Anahtar Kelimeler: Peroksinitrit, 3-nitrotirozin, Ürik asit, Askorbat
Amaç: Bu çalışma, in vivo ve in vitro olarak ONOO" aracılıklı oksidatif stresin etkilerini görmek için yapılmıştır. Materyal ve Metodlar: İn vitro çalışmalarda; 0.5-1-2-4 mmol/L konsantrasyonlarında hazırlanan ONOO" rat plazmalarına eklenerek, ONOO in plazma ürik asit ve askorbik asit düzeylerine direkt etkisi araştırıldı. Ayrıca plazma 3-NT düzeylerine bakıldı. In vivo çalışmalarda ise; 12xl09 koloni oluşturan ünite/ ml/kg dozda E.coli intraperitonel olarak tatlara enjekte edildi. E.coli uygulamasından 6 saat soma rat kanları toplanarak, endojen olarak oluşan ONOO" in plazma ürik asit ile askorbik asit düzeylerine etkileri incelendi. Ayrıca ONOO" aracılıklı oksidatif stresin bir markın olarak plazma 3-NT düzeyleri de incelendi. Plazma ürik asit düzeyleri ürikaz metodu ile, askorbik asit düzeyleri ise 2,4 dinitrofenilhidrazin üzerine kurulan modifiye bir metodla saptandı. Plazma 3-NT düzeyleri ise HPLC metodu ile yapıldı. Bulgular: İn vitro çalışmalarda; eksojen olarak eklenen ONOO" in doza bağlı olarak plazma 3-NT düzeylerini artırırken, plazma ürik asit ve askorbik asit seviyelerini azalttığını gözledik. İn vivo çalışmalarda ise; kontrol gruplarına göre lipopolisakkarit tarafından indüklenen stresin, plazma 3- NT düzeylerini önemli ölçüde artırdığını gözledik (p< 0.001). Ayrıca, E.coli enjekte edilen gruplarda plazma lirik asit değerleri hemen hemen kontrolün yarısına kadar inerken (p< 0.01), benzer şekilde plazma askorbik asit düzeyleri de kontrol grubu ile karşılaştırıldığında %61 oranında azaldı (p< 0.01). Sonuç olarak, in vitro ve in vivo ONOO", plazma askorbat ve ürik asit azalmasına ve 3-NT seviyesinin artmasına sebep olmaktadır.
Anahtar Kelimeler: Peroksinitrit, 3-nitrotirozin, Ürik asit, Askorbat
ABSTRACT
Aim: This study was designed to examine the effects of ONOO" mediated oxidative stress as in vivo and in vitro. Materials and Methods: In vivo studies; 0.5-1-2-4 mmol/L concentration of exogenously prepared ONOO" was added to the rat plasma and the direct effects of ONOO" on plasma uric acid and ascorbic acid were investigated. In addition, plasma 3-NT levels were investigated. In vivo studies; E.coli was injected intraperitoneally to the rats at a dosage of 12xl09 colony-forming units/ml/kg. Blood samples were collected 6 hour after administration of E.coli. The effects of endogen ONOO" on plasma uric acid and ascorbic acid were investigated. In addition, plasma 3-NT levels were investigated as a marker of ONOO" mediated oxidative damage. Plasma uric acid level was determined by the uricase method and ascorbic acid level was measured by the modified method of Roe and Keuther based on the 2,4 dinitrophenylhydrazine. In order to demonstrate the effects of ONOO", plasma 3-NT levels were measured by HPLC method. Results: In vitro studies; we have observed that addition of exogen ONOO resulted in a dose-dependent increase in the formation of 3-NT in plasma. We have also observed a dose-dependent decrease in uric acid and ascorbic acid plasma levels. In vivo studies; we have observed that lipopolysaccharide- induced stress resulted in a considerable increase in the 3-NT levels in comparison to the control group (p< 0.001). In addition, plasma uric acid levels in the E.coli injected group were nearly half of the control values (p< 0.01). Similarly, plasma ascorbic acid levels were decreased in the E.coli-injected group by 61% in comparison to the control group (p< 0.01). In conclusion, as is the case in in vitro, in vivo formation of ONOO" also cause depletion of plasma ascorbate and uric acid level and increase of plasma 3-NT level.
Keywords: Peroxynitrite, 3-Nitrotyrosine, Uric acid, Ascorbate
Aim: This study was designed to examine the effects of ONOO" mediated oxidative stress as in vivo and in vitro. Materials and Methods: In vivo studies; 0.5-1-2-4 mmol/L concentration of exogenously prepared ONOO" was added to the rat plasma and the direct effects of ONOO" on plasma uric acid and ascorbic acid were investigated. In addition, plasma 3-NT levels were investigated. In vivo studies; E.coli was injected intraperitoneally to the rats at a dosage of 12xl09 colony-forming units/ml/kg. Blood samples were collected 6 hour after administration of E.coli. The effects of endogen ONOO" on plasma uric acid and ascorbic acid were investigated. In addition, plasma 3-NT levels were investigated as a marker of ONOO" mediated oxidative damage. Plasma uric acid level was determined by the uricase method and ascorbic acid level was measured by the modified method of Roe and Keuther based on the 2,4 dinitrophenylhydrazine. In order to demonstrate the effects of ONOO", plasma 3-NT levels were measured by HPLC method. Results: In vitro studies; we have observed that addition of exogen ONOO resulted in a dose-dependent increase in the formation of 3-NT in plasma. We have also observed a dose-dependent decrease in uric acid and ascorbic acid plasma levels. In vivo studies; we have observed that lipopolysaccharide- induced stress resulted in a considerable increase in the 3-NT levels in comparison to the control group (p< 0.001). In addition, plasma uric acid levels in the E.coli injected group were nearly half of the control values (p< 0.01). Similarly, plasma ascorbic acid levels were decreased in the E.coli-injected group by 61% in comparison to the control group (p< 0.01). In conclusion, as is the case in in vitro, in vivo formation of ONOO" also cause depletion of plasma ascorbate and uric acid level and increase of plasma 3-NT level.
Keywords: Peroxynitrite, 3-Nitrotyrosine, Uric acid, Ascorbate
.: Process List